Методика отбора проб для гриппа и ОРВИ
Методическое письмо рекомендации по отбору проб Роспотребнадзор

Направление на РТГА, мазков в ПЦР и вирусологическую лабораторию

Лабораторная диагностика гриппа и острых и респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) проводится в соответствии с санитарно–эпидемиологическими правилами  СП 3.1.2.3117-13 «Профилактика гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций».

Диагностика гриппа и ОРВИ основана на четырех методах

1. Обнаружение РНК или ДНК вирусов гриппа и ОРВИ при
исследовании мазков из полости носа и ротоглотки методом ПЦР;

2. Определение нарастания титра антител в парных сыворотках
крови больного

(первая порция крови из вены должна быть отобрана в начале заболевания (1-3 день); вторая порция - в период реконвалесценции (на 10-12 день заболевания и позднее) серологическим методом (реакция торможения гемагглютинации — РТГА);

3. Обнаружение антигенов вируса в мазках из носовой полости (цилиндрический эпителий, содержащий вирусные антигены)
больных методом иммунофлюоресцентного анализа (ИФ);

4. Выделение вирусов гриппа методом заражения куриных
эмбрионов или перевиваемых культур из отделяемого слизистой
носа вирусологическим методом.

Отбор клинических материалов должен проводиться обученным 
персоналом с применением средств индивидуальной защиты. 

Отбор  материала  проводится  в  соответствии  с  методическими 
рекомендациями N 0100/4434–06–34 «Быстрая диагностика гриппа и других ОРВИ иммунофлуоресцентным методом».

Методические рекомендации "Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа А (H1N1), у людей".

Письмо Роспотребнадзора от 26.09.2017 №01/12890-17-32 «О Направлении рекомендаций по отбору проб на респираторные вирусы»

Отбор, упаковка, хранение и транспортировка проб должна проводиться в соответствии с санитарно-эпидемиологическими правилами СП 1.3.2322–08 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней".

Забор соскоба из полости носа (ИФ)

Оптимальным сроком отбора клинического материала являются первые 1–3 суток от начала заболевания. Перед взятием материала из носа необходимо очистить носовые ходы от слизи.

Забор соскобов из полости носа производят сухими стерильными зондами с вискозным тампоном (свабами)или велюр-тампон назофарингеальный. Зонд вводят по наружной стенке носа на глубину 3–5 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, делают вращательное движение, дают пропитаться  секретом в течение 1 минуты и удаляют вдоль наружной стенки носа.

      После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают стерильную одноразовую пробирку  с 0,5 – 1,0 мл стерильного забуференного  0,9% раствора натрия хлористого, рН 7,2–7,4. Доставка материала в лабораторию в течение двух часов. Замораживание должно быть исключено.

Пробирки с тампонами должны быть дополнительно герметизированы скотчем или лейкопластырем для предотвращения разгерметизации и контаминации при транспортировке. При необходимости конец зонда отламывают, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки.

Каждая проба должна быть маркирована. Маркировка проб должна соответствовать сопроводительным документам. 

Доставка в лабораторию для ИФ в течение нескольких часов.

Забор мазков из носоглотки и ротоглотки для ПЦР

В диагностических целях — при первом обращении за медицинской помощью, но не позднее 7 дней от появления симптомов гриппа/ОРВИ, и не позднее 14 дней — при бронхитах и пневмонии.

Мазки из ротоглотки берут сухими стерильными зондами с вискозным тампоном вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки (обязательно!) после предварительного полоскания полости рта чистой питьевой водой.

После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 0,5- 1,0 мл стерильного 0,9% изотонического раствора натрия хлористого.

Допускается хранение материала до проведения исследования в течение 3 суток при температуре от 2 до 8°С, более длительно — при температуре не выше минус 16°С.

 

При использовании пробирок типа Эппендорф конец зонда отламывают движениями вниз/вверх/вниз, придерживая крышкой пробирки с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть пробирку.

 

При заболеваниях нижних дыхательных путей (бронхит, бронхиолит, пневмония) собирают мокроту или аспират из трахеи:

- Мокроту при глубоком откашливании собирают в стерильные герметичные одноразовые пластиковые контейнеры после предварительного полоскания полости рта водой.

- Аспираты из трахеи (эндотрахеальный аспират)или БАЛ получают традиционным способом и помещают в стерильные герметичные одноразовые пластиковые контейнеры.

Допускается хранение материала до проведения исследования в течение 3 суток при температуре от 2 до 8⁰С, более длительно – при температуре не выше минус 16⁰С.

Кровь для серологического исследования (РТГА)

В лабораторию должны быть доставлены две порции сыворотки
больного  (парные сыворотки). Первая порция крови должна быть
взята в начале заболевания (1–3 день). Вторая порция — в период реконвалесценции (на 10–12 день заболевания и позднее).

Кровь должна быть получена из локтевой вены в количестве 3–4 см³ в стерильную сухую пробирку. После отделения сыворотки проба должна быть помещена в чистую посуду, герметично закрыта и сохраняться до забора второй пробы крови при температуре (+4⁰–8°С). Транспортировка обеих проб должна осуществляться с соблюдением холодовой цепи.